زراعة المنوفية


السلام عليكم ورحمة الله وبركاته
عزيزي الزائر اهلا وسهلا بك في منتدي زراعة المنوفية
إذا كنت زائر يسعدنا ويشرفنا ان تسجل وتكون من ضمن اعضاؤه وتتمتع بصلاحيات الأعضاء ، اما إذا كنت عضوا فتفضل بالدخول . دمتم برعاية الله وحفظه
إدارة المنتدى

تقدير النيتروجين الكلي في الاغذية

استعرض الموضوع السابق استعرض الموضوع التالي اذهب الى الأسفل

تقدير النيتروجين الكلي في الاغذية

مُساهمة من طرف drosamaali في الثلاثاء 27 مارس 2012, 5:18 pm

تقدير النيتروجين الكلي في الاغذية
Determination of total nitrogen in foods

** طريقة ميكرو كلداهل : microkjeldahl method

** اساس التقدير :-

1. يتم تحويل المركبات النيتروجينيه بالعينه الي كبريتات امونيوم (NH4)2 SO4 وذلك عن طريق غليان العينه مع حامض كبريتيك مركز ( مرحلة الهضم ) .
2. تحطيم او تكسير الامونيوم السابق تكوينها بواسطة الصودا الكاويه المركزه (40٪) وتحرير الامونيا منها عن طريق التقطير بالبخار وفي نظام مقفل واستقبالها في محلول 2٪ من حمض البوريكH3BO3 .
3. معايرة بورات الامونيوم ( NH)3 BO3 المتكونه من حمض HCL معلوم القوه وبمعرفة حجم الحامض يمكن حساب كمية النيتروجين في العينه ( مرحلة المعايره ) .

** المحاليل والادوات اللازمه :

1- حمض كبريتيك مركز 2- محلول صودا الكاوية 40% .
3- حمض بوريك 2% 4- حمض هيدروكلوريك 10/N (2.8 مل HCL مركز ونقي وتكمل الي 2لتر بالماء المقطر ) .
5- محلول كبريتات امونيوم قياسي (0.943 جم (NH4)2SO4 سبق تجفيفها فى الفرن تذاب فى 1لتر ماء مقطر ويضاف إليها 4نقاط من حمض كبريتيك مركز وترج جيدا ) .
6- دليل مختلط mixed indicator ( 20 مليجرام أحمر الميثيل + 100 مليجرام أخضر البروموكريزول تطحن جيدا فى هون زجاجى مع كحول الإيثايل ويكمل الحجم الى 100مل بالكحول ).
7- مسحوق الهضم digestion mixture ( 20 جزء من كبريتات البوتاسيوم K2SO4+ 5 أجزاءمن كبريتات النحاس اللامائية + 0.5 جزء ثانى أكسيد السيليينم SE O2 وتخلط جيدا فى هون .
8- دوارق هضم كلداهل ذات عنق طويل سعته 100 أو 250 مل .
9- حجر خفاف أو كرات زجاج لتنظيم الغليان .
10- ماصات سعة 5، 10 مل .
11- دوارق مخروطية سعة 100 أو150 مل .
12- سحاحة سعة 50مل .
13- وحدة تقطير ميكروكلداهل .

** طريقة التحضير :-

1- خذ وزنه مناسبة من العينة (0.5 – 1.5 جم ) فى دورق هضم كلداهل .
2- أضف اليها 0.5 جم من مسحوق الهضم .
3- اذا كانت العينة جافة بللها بقليل من الماء المقطر .
4- أضف الى الدورق كرتين من الزجاج أو بعض قطع من الحجر الخفاف .
5- أضف الى الدورق بحذر حوالى 5-10 مل حمض كبريتيك مركز .
6- ضع دورق الهضم على لهب هادئ فى أول الأمر واستمر فى التسخين البطئ حتى يتوقف
الفوران وتتحول محتويات الدورق من اللون الأسود الى البنى .
7- ارفع قوة اللهب تحت الدورق واستمر فى الغليان حتى تصير المكونات عديمة اللون
( وعادة من 3-4 ساعات حسب نسبة البروتين والألياف بالعينة ) .
8- أبعد اللهب وأترك الدورق حتى يبرد تماما ( نهاية مرحلة الهضم ) .
9- أنقل محتويات دورق الهضم كميا بالماء المقطر الى دورق معيارى سعة 100مل .
10- خذ 5 ملمن هذا المحلول وأنقلها الى وحدة التقطير .
11- أضف الى العينة 10مل من محلول الصودا الكاوية 40% وأقفل الجهاز بسرعة وأبدأ فى
إمرار البخار بالعينة .
12- ضع الدورق المخروطى المحتوى على 5 مل حمض بوريك 2% و 4 نقط من الدليل
المختلط بحيث تكون نهاية المكثف منغمرة تماما فى محلول حمض البوريك .
13- استمر فى التقطير لمدة 10 دقائق على الأقل أو حتى يتجمع 50 مل من المقطر .
14- أبعد اللهب وأغسل المكثف بالماء المقطر ( نهاية مرحلة التقطير ) .
15- عاير محتويات الدورق المخروطى بواسطة حمض HCL N/10 من السحاحة حتى
نقطة التعادل ( تحول لون محتويات الدورق المخروطى من الأخضر الى الأحمر) .
16- أحسب % للبروتين فى العينة من المعادلة التالية :-

PROTEIN% = T.V /F × dilution / W × K ×100/ 1000

**حيث :-
T.V حجم حمضHCL المأخوذ للمعايرة (مل).
F معامل حمض الهيدروكلوريك (مل).
W وزن العينه بالجرام.
K معامل تحويل النيتروجين (6.25-5.75 حسب نوع الغذاء أو الحبوب)

أو من المعادلة

Ng/kg =
(mL HCl – mL blank) x normality x 14.01
Weight (g)




عدل سابقا من قبل drosamaali في الجمعة 06 أبريل 2012, 8:06 pm عدل 2 مرات
avatar
drosamaali

عدد المساهمات : 498
تاريخ التسجيل : 20/04/2011
الموقع : http://minufiya-agri.moontada.net/

معاينة صفحة البيانات الشخصي للعضو

الرجوع الى أعلى الصفحة اذهب الى الأسفل

رد: تقدير النيتروجين الكلي في الاغذية

مُساهمة من طرف drosamaali في الجمعة 06 أبريل 2012, 8:01 pm

Nitrogen analysis by micro-Kjeldahl method

Nitrogen is the major element next to carbon, hydrogen and oxygen found in living things. Nitrogen occurs in amino acids, purine and pyrimidine bases, vitamins, aminosugars, alkaloids, compound lipids etc. however, the major nitrogen source is proteins. In most proteins, nitrogen constitutes 16% of the total make-up and hence, the total nitrogen content of a sample is multiplied by 6.25 to arrive at the value of the crude protein. By and large micro-kjeldahl technique is adopted to estimate the total nitrogen content in a variety of samples ranging from microbial cells to meat. The procedure described here is highly suitable for food samples such as cereals and pulses flour. In addition, procedures for non-protein nitrogen, protein nitrogen and amino nitrogen are also called.




Principle
The nitrogen in protein or any other organic material is converted to ammonium sulphate by H2SO4 during digestion. This salt, on steam-distillation, liberates ammonia which is collected in boric acid solution and titrated against standard acid. Since 1mL of 0.1N acid is equivalent to 1.401mg N, calculation is made to arrive at the nitrogen content of the sample.


Material
⇒ Kjeldahl Flasks : 30mL hard glass flasks (10mL size for micro samples)
⇒ Digestion Rack : Commercial heating apparatus
⇒ Distillation Apparatus : Glass distillation apparatus assembly
⇒ Sulphuric Acid Sp. Gr. 1.84
⇒ Mercuric Oxide
⇒ Potassium Sulphate
⇒ Sodium Hydroxide – Sodium thiosulphate solution: Dissolve 600g NaOH and 50g Na2S2O3.5H2O in distilled water and make to one liter.
⇒ Indicator Solution: Methyl red 0.2g/100mL ethanol, methylene blue 0.2g/100mL ethanol. For mixed indicator, two parts of methyl red solution are added to one part of methylene blue solution.
⇒ Boric Acid 4% solution
⇒ Standard HCl or H2SO4, 0.02 N
⇒ Boiling Chips and/or Glass Beads




Procedure
1.
Weigh 100mg of the sample (containing 1 to 3mg nitrogen) and transfer to a 30mL digestion flask.
2.
Add 1.9 ±0.1g potassium sulphate and 80 ±10mg mercuric oxide and 2mL conc. H2SO4 to the digestion flask. If sample size is larger than 20mg dry weight, 0.1mL H2SO4, should be added for each 10mg dry material.
3.
Add boiling chips and digest the sample till the solution becomes colorless (the time of digestion will vary with regard to the size of the sample, temperature, and the mode of digestion).
4.
After cooling the digest, dilute it with a small quantity of distilled ammonia-free water and transfer to the distillation apparatus (when the nitrogen content of the sample is high, the digest can be made up to a known volume and an aliquot may be transferred to the distillation flask). The kjeldahl flask should be rinsed with successive small quantities of water.
5.
Place a 10mL conical flask containing 5mL of boric acid solution with few drops of mixed indicator with the tip of the condenser dipping below the surface of the solution.
6.
Add 10mL of sodium hydroxide-sodium thiosulphate solution to the test solution in the apparatus.
7.
Distill and collect the ammonia on boric acid (at least 15-20mL of distilled should be collected).
8.
Rinse the tip of the condenser, and titrate the solution against the standard acid until the first appearance of violet color, the end point.
9.
Run a reagent bank with an equal volume of distilled water and subtract the titration volume from that of the sample titre volume.


Calculation
The nitrogen content of the sample can be calculated based on any one of the following formulae as the case may be
Ng/kg =
(mL HCl – mL blank) x normality x 14.01
Weight (g)

Ng/kg =
(mL HCl – mL blank) x normality x 14.01 x final volume
Weight (g) x aliquot volume


Non-Protein Nitrogen
1. Extract a known quantity of powdered material (100mg) with ice cold 10% TCA (10mL). Proteins are precipitated while non-protein nitrogen gets extracted).
2. Centrifuge, wash the precipitate with TCA, pool all the supernatants and make up to a known volume (25 or 50mL)
3. Take an aliquot and distill as described earlier.
4. Titrate against the standard acid , and calculate the nitrogen content. This gives the percentage of non-protein nitrogen.


Protein Nitrogen
Multiplying total nitrogen value with 6.25 will give the crude protein content which also includes non protein nitrogen. To get true protein content, deduct the non-protein nitrogen from the total nitrogen and then multiply with the factor.

Amino Nitrogen
1. Estimate the total free amino acid content by clicking here.
2. Multiply the percentage equivalent of leucine with 14/131 to get the percentage of amino nitrogen. If any amino acid other than leucine is used as standard, introduce the molecular weight of that amino acid in the denominator.


Notes
1.
Care must be taken so as to get a representative and homogeneous sample.
2.
When greater quantity of sample (500mg) is used and the digest is diluted before an aliquot is transferred to the distillation set, care should be taken that the actual quantity of sulphuric acid so transferred does not exceed the capacity of the 10mL of NaOH- Na2S2O3 solution. The solution being distilled out should always be strongly alkaline.
3.
The method described is meant for the conventionally operated distillation apparatus and does not attempt to give the methodology for automatic distillation sets that are commercially available. In such cases, the research worker has to follow the supplier’s manual for specific procedures.
4.
If the test solution is still yellow-colored even after prolonged digestion, addition of few drops of perchloric acid or hydrogen peroxide will assure complete oxidation and to get a colorless solution.
5.
Appropriate factors should be calculated for the acid normalities prepared in the laboratory based on the following
1mL 0.1N acid = 1.401mg N
6.
A known concentration of ammonium sulphate solution can be distilled as a standard check, often.
7.
In general, the nitrogen content is multiplied by the factor 6.25 to arrive at the percentage of crude protein which is based on the assumption that nitrogen constitutes to 16% of a protein. However, the nitrogen percent varies with the amino acid composition of the proteins. For more refined expression of protein percentage in samples, different factors are used. These factors were arrived at by amino acid composition. Some such factors are given below:

Item
Conversion factor
Wheat (whole)
5.83
Wheat flour
5.70
Wheat bran
6.31
Rice
5.95
Rye, barley and oats
5.83
Groundnut
5.46
Soya
5.71
Sesame, safflower and sunflower
5.30
Milk and cheese
6.38
Other foods
6.25


References
1. FAO Nutritional Studies No. 24 (1970) Amino Acid Content of Foods and Biological Data on Proteins FAO Rome.
2. Pellett, L P and Young, V R (1980) Nutritional Evaluation of Protein Foods UN Univ Publ.
3. Theymoli Balasubramanian and Sadasivam, S (1987) Plant Foods Hum Nutr 37 41.
avatar
drosamaali

عدد المساهمات : 498
تاريخ التسجيل : 20/04/2011
الموقع : http://minufiya-agri.moontada.net/

معاينة صفحة البيانات الشخصي للعضو

الرجوع الى أعلى الصفحة اذهب الى الأسفل

رد: تقدير النيتروجين الكلي في الاغذية

مُساهمة من طرف drosamaali في الجمعة 06 أبريل 2012, 8:19 pm

[ندعوك للتسجيل في المنتدى أو التعريف بنفسك لمعاينة هذه الصورة]
avatar
drosamaali

عدد المساهمات : 498
تاريخ التسجيل : 20/04/2011
الموقع : http://minufiya-agri.moontada.net/

معاينة صفحة البيانات الشخصي للعضو

الرجوع الى أعلى الصفحة اذهب الى الأسفل

استعرض الموضوع السابق استعرض الموضوع التالي الرجوع الى أعلى الصفحة


 
صلاحيات هذا المنتدى:
لاتستطيع الرد على المواضيع في هذا المنتدى